大黄作为我国大宗药材之一,其主要生物活性成分分析法

【摘要】：大黄作为我国大宗草药之一,其主要生物活性成份为游离蒽醌类缩聚物,是典型的蒽醌类天然产物原料。现在,大黄中游离蒽醌类天然产物的提取方式有甲烷提取法、乙醇提取法、碱提法等游离蒽醌类化合物,在提取过程中还会使用到乙醇等有毒性挥发丙酮,同时在后期分离提纯过程中都会使用到乙醇、吡啶和氢氟酸硫化氢等有毒性丙酮,操作过程复杂,且对环境会导致严重污染,限制了大黄中游离蒽醌类天然产物的产业化生产。因而,本研究选用新型、绿色环保的低共熔丙酮作为大黄中五种游离蒽醌类缩聚物的提取丙酮,以传统有机丙酮丁醇为对照,通过主成份剖析法从13种低共熔丙酮中筛选出适宜于提取大黄中五种游离蒽醌类缩聚物的低共熔丙酮,并视察了最适低共熔丙酮组分摩尔比、含水量对五种游离蒽醌类缩聚物提取率的影响,同时辅以Box-(BBD)实验设计对其提取工艺进行了优化,最后选用大孔吸附树脂法对低共熔丙酮提取液中五种游离蒽醌类缩聚物进行富集分离提纯,为大黄中游离蒽醌类缩聚物的提取及分离提纯提供一种新的方式。主要研究结果如下:1通过对测量波速、流动相、梯度洗脱程序、柱温及流速等色谱条件进行优化,确立了同时测量大黄低共熔乙腈提取液中五种游离蒽醌类缩聚物的HPLC-UV剖析检验方式:色谱柱:XDB-Cl8(4.6×250mm,5μm),流动相机制:0.10%乙酸水氨水(A)-丁二烯(B),流速:1.0mL/min,梯度洗脱条件:0～15min,70～100%B;15min～20min,100～70%B;20～25min,70%B,检查波速264nm,柱温30℃进样量10μL。 #

同时对该办法进行方式学调研,结果阐明,该办法线性关系良好(R2≥0.9993);实验再现性高,五种游离蒽醌缩聚物的峰面积RSD为1.2%～2.4%,其保留时间的RSD为0.4%～0.6%;实验仪器日间及欧盘精密度高,五种游离蒽醌缩聚物的峰面积RSD为1.5%～3.9%,保留时间RSD为0.3%～0.9%,符合测量标准;稳定性良好,五种游离蒽醌类缩聚物标准品峰面积的RSD为1.5%～3.6%,其保留时间的RSD为0.2%～0.8%;五种游离蒽醌类缩聚物的加标回产率为98.61%～103.46%,相对标准误差RSD均大于4.1%。因而,阐明本研究用此HPLC-UV测试方式测量大黄低共熔丙酮提取液中五种游离蒽醌类缩聚物是可行的。2本研究选用新型、绿色环保的低共熔丙酮作为大黄中五种游离蒽醌类缩聚物的提取丙酮,以传统有机丙酮丁醇为对照,选用主成份剖析法从13种低共熔丙酮中筛选出最适合提取大黄中五种游离蒽醌类缩聚物的低共熔丙酮机制,并视察了最适低共熔丙酮组分摩尔比及含水量对提取率的影响。结果阐明,低共熔丙酮机制、组分摩尔比及含水量对五种游离蒽醌类缩聚物提取率都有影响,其中组分摩尔比对提取率影响差别性不明显,机制及含水量对提取率影响明显,最适低共熔丙酮的最优参数为:机制为乳酸/樱桃糖,组分摩尔比为1:2游离蒽醌类化合物,含水量为20%。

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3通过单诱因实验,选用提取时间、提取体温及液固比三个诱因为自变量,以总游离蒽醌提取率为因变量,采Box-(BBD)实验设计对低共熔丙酮提取大黄中五种游离蒽醌类缩聚物的提取工艺进行优化。结果阐明,提取时间、提取气温和液固比在一定范围内对大黄中五种游离蒽醌类缩聚物提取率均有一定的推动作用。模型确定的最优提取工艺条件为:提取气温为81.42°C,提取时间为1.53h,液固比为25.51mL/g,提取率为25.38mg/g。考虑到实验操作的便捷性,确定的最优条件为:提取气温为82℃,提取时间为1.5h,液固比为26mL/g。按此最优提取工艺条件进行提取,经3次垂直实验测得总游离蒽醌的平均提取率为25.28±0.07mg/g,模型的实测值与预测值误差较小,阐明该回归模型稳定,靠谱,能较差的预检测验提取率。4分别选用了DM130、X-5、AB-8和DM301四种大孔吸附树脂对低共熔丙酮中五种游离蒽醌类缩聚物进行富集分离。结果阐明,四种大孔吸附树脂对五种游离蒽醌类缩聚物都有较差的分离疗效,其中DM130型大孔吸附树脂的富集分离作用最好,五种游离蒽醌类缩聚物的回产率分别为84.08%、79.51%、84.96%、81.83%和78.35%,四种大孔吸附树脂分离疗效的强弱顺序为:-5AB-。 #